山茱萸水溶性总提取物对肾阳虚动物模型生命质量和肾上腺组织的影响

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山茱萸水溶性总提取物对肾阳虚动物模型

生命质量和肾上腺组织的影响

李春生%张国玺%石体仁%董小霞%孙

摘要

为了探讨山茱萸补肾阳作用*复制氢化考的松致肾阳虚

丕+李电东+许鸿章+指导!陈可冀%

采用上海第二医%1-肾阳虚动物模型的复制与用药!

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科大学邝安以肾上腺皮质激素造模的模型^0将雄性大鼠随机分为3组*每组%/只0正常空白对照组每只灌胃按每日%’7‘abT给予自来水*其余/组每只每天上午在臀部皮下注射氢化考的松’相当1/7%’’\"‘aT于氢化考的松每日+/7)0与此同时*模型空白‘TbT

对照组每只灌胃给予自来水每日%’7.模型阳性‘abT药对照组每只按每日-1’7‘abT灌胃给予西洋参蜂王

每%水溶液含西洋参蜂王浆口服液浆水溶液\"‘a’1-)0山茱萸小4中4大剂量组*每日每只灌胃分‘a

别给予’1-/74’1$74%1(7TbTTbTTbT山茱萸总提取物水溶液0连续注射氢化考的松&天后*停药3天0在造模同时*连续灌胃给予自来水或药物%处死动#天*物0

动物模型*观察山茱萸水溶性总提取物对肾阳虚大鼠的影响0结果山茱萸水溶性总提取物能够提高肾阳虚大鼠的存活率和生命质量0其中大剂量组的存活率为&明显高于中剂量#1#’2*组\"小剂量组4模型阳性药组和模型空白对照组\"均-313&2)4投以大4中剂量的山茱萸水溶性总提为+313&2*1’/)*5均6’取物*可以使肾阳虚模型动物肾上腺病理改变显著减轻\"56保护肾阳虚’1’%)0说明山茱萸水溶性总提取物具有补益肾阳4动物模型肾上腺组织*提高肾阳虚模型生命质量的作用0主题词

肾阳虚7中药疗法

山茱萸7药理学

山茱萸为山茱萸科灯台树属植物山茱萸\"89:;<=的干燥果肉*功能补肾益肝4H)>??@A@;BCC=DEFGFIJKLL

涩精止汗*是著名的传统延缓衰老药物0其地道药材的主产区在河南省南阳地区伏牛山南麓*即后汉医学大家张仲景于M少室山N之采药地0%我们为$$/年%月*探讨该药的补肾阳作用*观察了该药水溶性总提取物对肾阳虚动物模型的影响*现报告如下0

%材料与方法

选用健康活泼OE%1%实验动物!’PIQR雄性大鼠$

只*体重%由北京友谊医-’S%&’*#月龄*%级动物*T院动物室提供0

山茱萸水溶性总提取物*由中国医学%1+受试药物!

科学院医药生物技术研究所提供0每克水溶性总提取物相当于山茱萸生药+0其中主要成分是山茱萸总多T

糖0原生药从河南省西峡县药材公司二郎坪分公司购西洋参蜂王浆口服液做阳性对照药*中国医学科学买0

院药用植物资源开发研究所实验药厂生产*批号$-’++30/2氢化考的松注射液做造模药用0北京第三制药厂生产*批号$#’#%+0

医用显微图像分析仪*国产P%1#仪器设备!UV,%型*做组织细胞灰度测定用0生物化学发光测定仪*上海上立检测仪器厂生产*做血清丙二醛DWX,Y型*超氧化物歧化酶\"测定用0\"4)Z[\\)D][

基金项目!国家自然科学基金资助项目\"#$%&’(&()北京海淀区西苑\"%中国中医研究院西苑医院*%’’’$%)

+中国医学科学院医药生物技术研究所

收稿日期!修回日期!+’’’,’-,+%.+’’%,’%,’/

实验开始后*每#天称重%1/观察内容及监测指标!

观察大鼠的体形4毛色4步态4觅食及活动情况*%次*

并记录动物每天死亡只数0于最后%天给药%小时后*处死全部动物0取血送实验室*用化学发光法测定各组动物血清Z[并与肾上\\和D][含量0取睾丸称重*腺一起进行病理学和组织化学研究0肾上腺4睾丸等睾丸经c甲基Wc染色观察病理学改变0肾上腺4aEQP绿,焦宁技术显示核糖核酸\"然后用医用图像.de\\)分析仪测定其感光度0对于动物生命质量的评价*采用觅食多少*将精神状态分为好4中4差#级0大鼠的毛色分两级*凡被毛浓密有光泽*呈乳白色者评为好*反之为差0对于实验过程中出现的重度腹胀或腹水记#分

中度腹胀或腹水记+分\"轻度腹胀或\"fff).ff).少量腹水记%分\"无腹胀或腹水记’分\"脏器f).,)0

的病理改变*亦采用积分法评定0凡细胞肿胀4变性4坏

等级评定积分法0例如*依据动物的活动4步态4修饰4

死呈大量者*记#分\"中等量者*记+分\"fff).f

少量者*记%分\"无肿胀4变性4坏死者*记’f).f).分\"糖原4均直,)0血清与内脏之Z[4\\4D][de\\*接进行定量监测0

计数资料采用等级序值法计算*计%13统计学处理!

量资料采用方差分析0

+结果+1%山茱萸水溶液总提取物对肾阳虚大鼠生命质量

万方数据O&3,O

表!各组大鼠存活率比较

组

别

动物数!%!%!%!%!%!%

死亡数&*!!!!!!-存活数!!’&&&!%

存活率\"#$’()((&+)+’,+)+’,+)+’,+)+’!--)--

S,--!4S&,4S*PQR7S9TUV>?D>组4精神状态与正常空白对照组相仿\")-%$B实验5M-但与模型空白对照组L正常空白对照组相比4均无统计学差异\")-%$B5M-表!示4山,)!),药物对肾阳虚大鼠存活率的影响H

茱萸大剂量组L正常空白对照组L山茱萸中剂量组大鼠存活率均高于模型空白对照组L山茱萸小剂量组和模型阳性药对照组4差异有显著意义\")-%$B表明大56-剂量山茱萸水溶性总提取物能够补肾阳之虚4延长动物存活率B

表,示4各组,)!)(药物对肾阳虚大鼠腹胀的影响H与正常空白对照组相比4均有不同程度的腹胀B服西洋参蜂王浆4可使动物腹胀加重4而服大剂量山茱萸水溶性总提取物4可使腹胀显著减轻4两组间比较4差异有显著性\")-%$B56-,),山茱萸水溶性总提取物对肾阳虚大鼠血清

表(示4肾阳虚动物服山茱萸789和:;8的影响H水溶性总提取物后4各剂量组与各对照组相比4血清)-%$B789和:;8水平差异无显著性\"5M-,)(山茱萸水溶性总提取物对肾阳虚大鼠肾上腺的影响H表&示4山茱萸水溶性总提取物小剂量组L模型

阳性药对照组和模型空白对照组肾上腺病理改变4与大剂量及正常空白对照组相比4统计学差异山茱萸中L

非常显著\")-!$B肾阳虚大鼠服用山茱萸水溶性56-总提取物大L中L小剂量组L模型阳性药组L模型空白对正常空白对照组各组间对比4肾上腺C照组LD9含量感光灰度无显著统计学差异\")-%$B5M-(讨论

肾阳虚动物模型由上海第二医科大学邝安

教授

发现给药诸组动物腹中有少量腹水4结束处死动物后4

山茱萸大剂量组山茱萸中剂量组山茱萸小剂量组模型阳性药对照组模型空白对照组正常空白对照组

表,各组大鼠腹胀积分比较

组

别

大鼠存活数

!!’&&&!%

/腹胀积分\"01$.-)%%0-)%,-)’!0-)&3-)’%0-)%-!),%0-)%-!)--0-)---2

山茱萸大剂量组山茱萸中剂量组山茱萸小剂量组模型阳性药对照组模型空白对照组正常空白对照组

2与模型阳性药对照组比较46-)-%5

/表(各组大鼠血清7801$.9及:;8水平比较\"

组

别

@$789\"<=>?=?()330-)’(\"!!$()*,0-)*&\"’$(),!0-)&&\"&$()%&0-)**\"&$&)!(0-)’(\"&$()’-0-)’3\"!-$

$\":;8A@=?!(,,)30%*)%\"!!$!(&-)+03-)-\"’$!,3’)!0!!!)3\"&$!,%,)&0%-)-\"&$!((*)-0(,),\"&$!,*3)+0*()&\"3$

山茱萸大剂量组山茱萸中剂量组山茱萸小剂量组模型阳性药对照组模型空白对照组正常空白对照组

表中括号内为动物数B下同

表&各组大鼠肾上腺病理改变积分值

/及肾上腺C01$D9含量变化比较\".

组

别

肾上腺病理改变积分值

2EF

-)!*0-)+-\"!!$2EF-)’!0!),%\"’$

肾上腺C感光D9含量\"

灰度值的半定量单位$!3%)&-0*)((\"!-$!3’)!&0!-)&-\"’$,-*),%0%)%-\"&$,-&)--03)-+\"&$,-%)’%0’)!&\"&$,-!),-0+)!,\"!-$

山茱萸大剂量组山茱萸中剂量组山茱萸小剂量组模型阳性药对照组模型空白对照组正常空白对照组

,)’%0-)%-\"&$,)’%0-)%-\"&$,)%-0-)%*\"&$-2EF

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于!3+(年建立4是最早创建的中医动物模型B该模型依据临床肾阳虚患者呈肾上腺皮质功能低下4肾阴虚长期大量需要皮质激素患者呈肾上腺皮质功能亢进4

治疗的病人表现肾阴虚L皮质激素停用后表现为肾阳虚等研究结果而设计的B此模型建立之后4国内学者从病理生理L病理解剖L组织化学L药物治疗反证等方面4做了大量研究工作B目前一般认为4使用大剂能够使机体呈现烦躁多动等阴虚征象4同时可致下丘脑N垂体N肾上腺皮质轴反馈抑制4潜伏着I阴损及

阳K的病理机转B当皮质激素突然停用4下丘脑N垂体N肾上腺皮质轴的抑制状态即暴露出来4对外界环境变化的应激L适应能力显著下降4水L电解质代谢出现少量腹水4生命质量下降4死亡率上升4呈突出

与山茱萸小剂量组比较4与模型阳性药对照组比较4256-)-!G与模型空白对照组比较4E56-)-!GF56-)-!

与存活率的影响

实验中观,)!)!药物对动物精神状态和体态的影响H察到4在采取I肾上腺皮质激素应用J停药法K的过程中4模型空白对照组4模型阳性药对照组4山茱萸大L中L小剂量组大鼠体形均变为头胸小而腹大4呈I烧瓶状K并出现少量腹水4正常空白对照组则无此现象B模4型空白对照组动物竖毛拱背4反应迟钝4活动及觅食减少4畏寒怕冷4精神状态很差G正常空白对照组与之相反4精神状态好统计学差异显著\"B两者经组间对比45万方数据而山茱萸水溶性总提取物及西洋参蜂王浆诸6-)-%$B

量外源性皮质激素于动物体4利用激素的生理效应4

失调4致动物竖毛拱背4畏寒怕冷4活动及觅食减少4

中医杂志$..\"年>月第0$卷第>期

\"#$%的肾阳虚表现!&本实验采用规范的造模方法#复

@0<,@

鼠肾上腺水平&

制的动物模型与文献记载相符#因而我们认为是较为成功的肾阳虚动物模型&

本实验应用肾阳虚大鼠模型#对地道药材山茱萸水溶性总提取物#进行了补肾阳作用的整体’器官和细胞分子生物学水平研究&结果表明()山茱萸水\"*溶性总提取物能够提高肾阳虚大鼠的存活率#其中大剂量组的存活率为+,-,./#明显高于中剂量组)01-1+/*’小剂量组’模型阳性药组和模型空白对照组)均为$1-1+/*#差异显著&提示较大剂量山茱萸水溶性总提取物#有明显对抗氢化考的松的副作用#延长肾阳虚动物存活时间的功效&)服用山茱$*萸水溶性总提取物的肾阳虚动物#精神状态改善’毛色浓密光泽#腹胀明显好转&提示生命质量提高&),*使用氢化考的松后#动物肾上腺组织有显著的病理改变#如模型空白对照组显示细胞肿胀变性或坏死等#与正常空白对照组相比#有非常显著差异&实验结果证实#对于这一病理变化#人参蜂王浆和小剂量山茱萸水溶性总提取物都不能起到保护作用2而投予中’大剂量的山茱萸水溶性总提取物#可以保护肾上腺细胞#将其损伤程度减至最低限度#使其接近于正常大

本实验各组345和674水平在造模’给药前

后无变化#推测与所采用动物均为健康成年期大鼠#而不是老年期大鼠有关&肾上腺组织化学染色895感光灰度在各组之间差异无显著性#提示山茱萸水溶性总提取物及人参蜂王浆对肾上腺895含量无影响&

山茱萸是我国0是俄.种用量大的骨干药材之一#罗斯以电子计算机筛选出的#在中’日’朝三国使用频率最高的$也是近年来中医药临床研:种植物药之一#究证明能够治疗糖尿病’冠心病’高血压病的主要药材之一#因此越来越受到人们重视&我们课题组首先研制成功山茱萸水溶性总提取物#观察到它对肾阳虚动物模型生命质量及多个脏器具有保护作用)尚有一部分内容拟另文发表*相信这一研究结果将有助于促进山#茱萸深层次开发利用&

参考文献

实用中医证候动物模型学;北京(北京医科大学’中国\"陈小野主编;

协和医科大学联合出版社#\"<<,(\"..=\"\"+;

中药药理研究方法学;北京(人民卫生出版社#$陈奇主编;\"<<,(<>$

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