鸡艾美耳球虫阶段性抗原的分子生物学研究进展

安徽农业科学，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎｈｕｉ　Ａｇｒｉ．Ｓｃｉ．２００６，３４（１６）：３９９１—３９９２　责任编辑刘月娟责任校对范世群　鸡艾美耳球虫阶段性抗原的分子生物学研究进展　王承民　，秦建华２　７何宏轩３　７郑素玲１，李任峰１（１．河南科技学院动物科学学院，河南新乡４５３ｏ０３；２河北农业大学动物科技学　院，河北保定０７１００１；３．中国科学院动物研究所国家野生动物疫病研究中心，北京１０００８０）　摘要从裂殖子表面抗原、细胞器抗原、子孢子抗原３个方面，综述了鸡艾美耳球虫阶段性抗原的分子生物学研究。　关键词艾美耳球虫病；抗原；分子生物学　中图分类号￥８５２．７２＋３　文献标识码Ａ　文章编号０５１７—６６１１（２００６）１６—３９９１—０２　目前由于耐药性、药物残留等问题，加之人们对肉蛋奶　盲肠免疫接种后却能刺激鸡体产生部分保护性免疫［６１。　等产品的质量要求更加严格，研究工作者们不得不转向疫　苗的研制。分子生物学技术应用于球虫免疫原性研究，不仅　对抗原的种类、结构、免疫原性以及在诱导机体产生抗球虫　保护性免疫的机制方面进行了分析，而且为球虫亚单位疫　苗的研制提供了手段。　１裂殖子表面抗原　Ｊｅｎｋｉｎｓ和Ｄａｍｅ等用Ｅ．ａｃｅｎ，ｕｌｉｎａ第３代裂殖子表面　抗原的多克隆抗体从ｃＤＮＡ文库中筛选出１０个片段，该片　段表达的融合蛋白分子量为１５０ｋＤａ，其中虫体蛋白为３５ｋＤａ，　该蛋白为裂殖子２５０　ｋＤａ免疫显性抗原的一部分，并具有　部分保护性…。Ｂｉｎｇｅｒ用兔抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ裂殖子表面抗原的抗　体从ｃＤＮＡ文库中筛选出一个片段，并在大肠杆菌中表达　出分子量为３３　ｋＤａ的重组蛋白［２１。Ｋｏ用抗裂殖子抗原的单　克隆抗体ＬＰＭＣ一６１从Ｅ．ｔｅｎｅ１１ａ子孢子ｃＤＮＡ文库中筛选　出一个片段，并在大肠杆菌中表达出分子量为１４２　ｋＤａ的　融合蛋白，其中虫体蛋白为３１　ｋＤａ。该虫体抗原与子孢子、　裂殖子和未孢子化的卵囊的１０～１２　ｋＤａ（有还原剂条件下）　和８０　ｋＤａ（无还原剂条件下）相对应。Ｃａｓｔｌｅ报道用该抗体　克隆出了一种ｃＤＮＡ片段，编码虫体１０　ｋＤａ蛋白（ＭＡ１６），　体外试验证实该融合蛋白（ＭＡ１６）能引起Ｔ细胞免疫反应＿３ｌ。　Ｆｆｉｅｄ用抗大配子体８２　ｋＤａ的多克隆抗体（Ｆ一３３）从大配子　体表达ｃＤＮＡ文库中筛选出一种ｃＤＮＡ片段（ｐｅｍ２３０），在原　核生物中表达出７３　ｋＤａ的蛋白，该蛋白对应于大配子体的　２３０　ｋＤａ的蛋白，但其免疫原性和保护性未见报道１４１。Ｊｅｎｋｉｎｓ、　Ｄａｍｅ鉴定的Ｅ．ａｃｅｎ，ｕｌｉｎａ的４５种主要抗原（分子量２０～２５０　ｋＤａ）中，绝大多数均位于裂殖子表面［１１。Ｍａｒｔｉｎ鉴定Ｅ．　ａ　ｅｎ，　ｌｉｎａ引起细胞介导以及体液免疫反应的抗原，电泳分　离裂殖子和子孢子成分．Ｍａ　ｎ还发现分子量在１２．７～１８．４　ｋＤ　的裂殖子成分干扰素产生多，攻毒后产生良好的抗体　反应；分子量在１８．４～２９　ｋＤａ的裂殖子成分可引起很高的抗　体滴度和少量淋巴细胞增殖；分子量在２９～４３　ｋＤａ的裂殖　子成分能引起大量淋巴细胞增殖，但抗体反应平常，干扰素　产生少；分子量在６０～１２７　ｋＤａ的裂殖子成分在抗体反应、　干扰素产生的量及淋巴细胞增殖方面均不明显嘲。谢明权等　认为第２代裂殖子抗原在免疫方面无应用价值；应用第２　代裂殖子蛋白加福氏完全佐剂，大剂量且多次免疫接种后　未能表现出保护性免疫应答，而有活力的第２代裂殖子经　基金项目　河南科技学院重点资助项目（０３１３）。　作者简介王承民（１９７８一），男，河北承德人，硕士，讲师，从事动　物寄生虫病和分子生物学研究工作。　收稿日期２００６—０３—１０　Ｗａｌｌａｃｈ等报道，宿主自然感染或人工感染球虫的配子体均　可诱发良好的免疫保护，高滴度的康复鸡血清或纯化配子　体免疫的血清主要识别分子量分别为５６、８２和２３０　ｋＤａ的　配子体抗原　】。Ｗａｌｌａｃｈ报道５６　ｋＤａ的配子体抗原能够对　Ｅ．ｍａｘｉｍａ的攻击感染提供部分被动保护＿８ｌ，而Ｆｒｉｅｄ等认为　它对编码大配子体的２３０　ｋＤａ基因所表达的重组蛋白的抗　体似乎能与成囊体特异性的结合　。研究表明，２３０　ｋＤ　裂　殖子抗原和配子体蛋白能够提供５５％～８０％的保护［９１。　２细胞器抗原　子孢子和早期第１代裂殖子中折光体是嗜锇酸的，电　子致密的均质细胞器可能与虫体贮存能量有关，但其功能　不详。入侵阶段虫体的棒状体和微线为一电子致密的嗜锇　酸结构，可能与虫体的入侵有关，但其功能不详。Ｄａ　ｆｏｒｔｈ和　Ａｕｇｕｓｔｉｎｅ用单克隆抗体研究了子孢子内部抗原，较为有意　义的抗原主要位于折光体内，分子量为２１～２８　ｋＤａｌｌＯ］。研究　表明，当Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ发育时折光体扩散到整个裂殖体，与折光　体作用的单抗能阻止其扩散而抑制裂殖体发育，说明折光　体在艾美耳球虫的无性发育阶段发挥重要作用。Ｊｅｎｋｉｎｓ用　抗Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ裂殖子顶复合器３０～４７　ｋＤａ的单抗筛选出　一种ｃＤＮＡ片段（Ｅａｍｚｐ　３０～４７）。编码虫体的棒状体和虫体　表面３０～４７　ｋＤａ　ｃＤＮＡ的一部分…ｊ。蛋白质印迹试验表明，　Ｅａｍｚｐ　３０～４７　ｋＤａ蛋白由裂殖体的４－３或４．０、３．８　ｋｈ的ＲＮＡ　表达，在子孢子中不表达。免疫试验表明，该ＥａｍｚＤ　３０～４７　ｋＤａ蛋白能引起Ｔ细胞免疫应答。Ｌａｕｒｅｎｔ用单克隆抗体克　隆出一种ｃＤＮＡ片段，该片段在大肠杆菌中表达出分子量为　８０　ｋＤａ的融合蛋白ＦＡ６Ｓ２，抗ＦＡ６Ｓ２抗体只与Ｅ－ａｃｅｎ，ｕｌｉｎａ、　Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ、Ｅ．ｍａｘｉｍａ和Ｅ．ｆａｌａｃｉｆｏｒｍｉｓ中惟一一种４３　ｋＤａ蛋　白反应；该抗原定位于折光体上，蛋白几乎不引起体液免　疫，原因是ＦＡ６Ｓ２蛋白不与感染球虫鸡的抗体反应，也不与　虫体自然抗体反应【ｌ２ｌ１＝ｖｅｒｒｎｅｕｌｅｎ先后用抗Ｅ－ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ子孢　子的单抗和兔抗子孢子的多抗从ｃＤＮＡ　ｋｇｔｌ　１文库中筛选　出一个片段，并在大肠杆菌中表达出分子量为１６０　ｋＤａ的　融合蛋白（ＥａｌＡＬａｃｚ），其中虫体蛋白为４５　ｋＤａ，用鸡抗该融　合蛋白的抗体证实为折光体膜上一种分子量为１００　ｋＤａ的　蛋白【ｌ３】。Ｊｅｎｋｉｎｓ用针对折光体膜上２２　ｋＤａ抗原的单抗筛选　出一种ｃＤＮＡ片段，并在大肠杆菌中表达出分子量为１２５　ｋＤａ的融合蛋白（ＭＡＩ—ＬａｃＺ），其中虫体蛋白约为１０　ｋＤａ，该　蛋白不引起体液免疫反应，能引起特异性细胞免疫反应　１。　Ｍｉｌｌｅｒ用抗Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ子孢子２８　ｋＤａ的单抗Ｍａｂ１２—０９从　ｃＤＮＡ文库中筛选出一个片段，并在大肠杆菌中表达出分子　量为１１５　ｋＤａ的融合蛋白。根据ＤＮＡ序列，推测出虫体蛋　维普资讯 http://www.cqvip.com

３９９２　安徽农业科学　２００６生　白分子量为１２　ｋＤａ，表明它能使免疫鸡产生部分保护性，该　重组抗原在体外能刺激致敏Ｔ淋巴细胞的转化ｌ１５１。Ｔｏｍｌｅｙ用　Ｅｔｈ１６片段从ｃＤＮＡ文库中筛选出一个ｅＤＮＡ片段，编码７４　ｋＤａ的蛋白，此蛋白与Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ的微线蛋白（Ｅｔｐ１００）关系密　［２】ＢＩＮＧＥＲ　Ｍ　Ｈ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｏｆ　Ｅ　ｔｅｎｅｌｌａ　ｍｅｒｏｚｏｉｔｅｓ　ａｎ（１　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｅｅｉｎｉａｖｉｒｕｓ［Ｊ］．　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．１　９９３．６　１：１　７９—１　８８．　ｆ３１　ＣＡＳＴＬＥ　Ｍ　Ｄ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉ０ｎ　ｏｆ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　Ｅ　ａｃｅ￣ｕｌｉｎａ　切。Ｐａｓａｍｏｎｔｅｓ用针对微线蛋白Ｅｔｐ１００的单克隆抗体筛选　Ｅ．ｍａｘｉｍａ卵囊的），ｅＤＮＡ文库技术及基于ＥｔｌＯ０基因序列　的ＰＣＲ技术，从Ｅ．ｍａｘｉｍａ克隆出微线蛋白Ｅｍｐ１００基因　１１６１。ａｎｔｉｇｅｎｅ　ｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ　ａｎｄ　ｍｅｒｏｚｏｉｔｅ　ｄＰｖｅｌ。ｐｍｅｎｔａｌｓｔａｇｅ　Ｊ］．　Ｊ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ　１９９１．７７（３）：３８４—３９０．　［４１　ＦＲＩＥＤ　Ｍ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　２３０　Ｋｄａｍａｃ－ｒｏｇａｍｅｔｅ—　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｖｉａｎ　ｃｏｃｃｉｄｉａｌ　ｐａｒａｓｉｔｅ　Ｅ　ｎｌａｘｉｎｌａ　ＩＪ】．　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．１９９２．５１：２５１—２６２．　参与细胞粘附及细胞一细胞接触有关的Ｅｍｐ１００、　【５】ＭＡＲＴＩＮ　Ａ，ＡＷＡＤＡＩ　ＬＡ　Ｓ，ＵＬＬＥＨＯＪ　Ｈ　Ｓ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｅｌ１．　ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｅｅｒｖｕｌｉｎａ　ａｎｔｉｇｅｎｓ［Ｊ］．Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ．　１９９５．３９：５３８—５４７．　Ｅｍｌ００和Ｅｔｌ００基因都存在于Ｅ．ｔｅｎｅ１１ａ和Ｅ．ｍａｘｉｍａ的微　线蛋白中，表明鸡球虫的微线很可能参与虫体与宿主的细　［６］谢明权，吴会贤．柔嫩　美耳球虫裂殖予免疫原性的研究ＩＪｌ＿畜牧兽　胞膜接触的过程。　３子孢子表面抗原　Ｊｅｎｋｉｎｓ和Ｄａｍｅ等鉴定了堆型和柔嫩艾美耳球虫子孢　子的一组　Ｉ标记的表面抗原、　Ｓ一氨基酸标记和未标记的　细胞浆和内膜成分，发现有３２～４５个主要抗原成分，分子量　为９～３５０　ｋＤｄ”。Ｄａｎｆｏｒｔｈ等报道有１９种抗原能与免疫血清　发生沉淀反应ｌ１０ｌ。Ｄａｎｆｏｒｔｈ等还用单克隆抗体技术鉴定子孢　子表面抗原，发现大多数能阻止子孢子侵入宿主细胞的单　抗与子孢子表面抗原起作用，并具有种特异性　。一些研究　者用免疫血清筛选出２５种与半乳糖苷酶融合的表面蛋白，　如ｃｓｚ一１和５４０１抗原，具有免疫潜能。ｃｓｚ一１抗原是Ｅ．　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ子孢子表面蛋白的一个约为１０～１５　ｋＤａ的片段，　该抗原能引发机体Ｔ细胞反应，但不具有保护性免疫作用；　５４０１抗原是Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ的一个３１　ｋＤａ的表面抗原片段，它对　Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ经口感染产生部分保护ｌｌ０ｌ，用该抗原免疫的鸡血清　对可溶性子孢子抗原进行免疫印记分析，与６６和２００　ｋＤａ　的抗原带反应。Ｂｒｏｔｈｅｒｓ利用ＴＡ４基因片段克隆出了　ｅＤＮＡ，ｅＤＮＡ序列说明内含子在ｍＲＮＡ成熟时被剪切掉，　合成的多肽在跨膜时切去３个多余的Ａｒｇ—Ａｒｇ—Ｌｅｉ１，再以二　硫键连接８和１７　ｋＤａ的多肽形成完整的ＴＡ４抗原　】。子孢　子表面抗原ＴＡ４分子量为２５　ｋＤａ，是在孢子化１６～２４　ｈ合　成的。Ｋｒａｍｅｒ用与子孢子２００　ｋＤａ蛋白反应的单抗７Ｂ２克　隆出了一种１．１　ｋｂ长的ｅＤＮＡ片段，并在大肠杆菌中表达　出分子量为４５　ｋＤａ的融合蛋白，单抗１２０７与Ｅ．ａｃｅｒ、ｒｕｌｉｎａ　的子孢子８～１２０　ｋＤａ的蛋白反应『ｌ９】。Ｋｏ用抗裂殖子抗原的　单克隆抗体ＬＰＭＣ一６１从Ｅ．ｔｅｎｅ１１ａ子孢子ｃＤＮＡ文库中筛　选出一个片段，并在大肠杆菌中表达出分子量为１４２　ｋＤａ　的融合蛋白，其中虫体蛋白为３１　ｋＤａ［２ｏ］。该虫体抗原与子孢　子和未孢子化的卵囊的１０～１２　ｋＤａ（有还原剂条件下）和８０　ｋＤａ（无还原剂条件下）相对应。　４小结　保护性抗原可能由各个阶段具有部分保护性的虫体抗　原共同组成。目前，重组抗原只能诱导产生部分保护性。研　究球虫防治的主要任务是克隆出各阶段虫体中具有部分保　护性的抗原，并且将各阶段的保护性基因制成核酸疫苗Ｉｍ］，　同时采用适当的提呈抗原系统如病毒载体表达系统ｌｌ６　以更　好防治鸡球虫病。　参考文献　［１］ＪＥＮＫＩＮＳ　Ｍ　Ｃ，ＤＡＭＥ　Ｊ　Ｂ．Ｉｄｅｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｍｍｕｎｏｄｏｍｉｎａｎｔ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｏｆ　Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｅｅｒｖｕｌｉｎａ　ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ　ａｎｄｍｅｒｏｚｉｏｔｅｓ…．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ，１９８７，２５（２）：１５５—１６４．　医学报，１９９４．２５（４）：３４０—３４５．　［７］　ｗＡＬＬＡＣＨ　Ｍ，ＭＥＮＣＨＥＲ　Ｄ，ＹＡＲＵＳ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａ：　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆｇａｍｅｔｏｅｙｔｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｎｔｉｇｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｐｒｏｔｅｅｔｉｖｅｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１　９８９，６８：４９—５６．　［８］ＷＡＬＬＡＣＨ　Ｍ．ＮＩＣＨＯＬＡＳ　Ｃ，ＳＭＩＴＨ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅ．ｍａｘｉｍａ　ｇａｍｅｔｏｅｙｔｅ　ａｎｔｉｇｅｎｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｕｓｅ　ｉｎ　ａ　ｓｕｂｕｎｉｔ　ｍａｔｅｒｎａｌ　ｖａｃｃｉｎｅ　ａｇａｉｎｓｔ　ｅｏｃｅｉｄｉｏｓｉｓ　ｉｎｅｈｉｅｋｅｎｓ［Ｊ］．Ｖａｃｃｉｎｅ．１９９５．１３（１４）：３４７—３５４．　［９】索勋，李国清鸡球虫病学［ＭＩ．北京：中国农业大学出版社，１９９８．　［１０］ＤＡＮＦＯＲＴＨ　Ｈ　ＤＡＵＧＵＳＴＩＮＥ　Ｐ　ＧＲＵＦＦ　Ｍ　Ｄ．Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎｅｏｎｆｅｒｓ　ｐａｒｔｉａｌ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎａｉｎｓｔ　ａｖｉａｎ　ｃｏｃｃｉｄｉａｌ　ｐａｒａｓｉｔｅｓ　ＩＪ］．Ｐｏｕｌｔｒｙ＂Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８９，６８：１６４３—１６５２．　［１１］ＬＡＵＲＥＮＴ　Ｆ　Ｂ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｅＤＮＡ　ｅｍ　ｏｄｉｎｇ　ａｎ　Ｅｉｍｅｒｉａａｅｅｒｖｕｌｉｎａ　７０　Ｋｄａ　ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　７０　Ｋｄａ　ｈｅａｔ－ｓｈｏｅｋｐｒｏｔｅｉｎ　ｆａｍｉｌｙ　．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ。１９９４．６６：３５９—３５２．　［１　２］ＶＥＲＭＥＵＬＥＮ　Ａ　Ｎ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｅｃｉｎｅ　ｄｍ　ｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｇａｉｎｓｔｅｏｃｅｉｄｉｏｓｉｓ：Ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｎｅｘｔ　ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｍａｌ　ｆｏｒ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．１９８９．６８：４９—５６．　［１３】ＪＥＮＫＩＮＳ　Ｍ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．ｅＤＮＡ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａｎ　ｉｍｎｍｎｏｇｅｎｉｃ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ａ　２２　ｋｄａ　ｓｕｒｆａｃｅｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｅｉｍｅｒｅａ　ａｅｅｒｖｕｌｉｎａ　ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ　ｌ　Ｊ＿．　Ｍｏｌｅｅｕｌａｒ　ａｎ￣ｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．１９８９．３２：１５３—１６２．　ｆ１４１　ＭＩＬＬＥＲ　Ｇ　Ａ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ａ　ｎｏｖｅｌｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｃｏｅｃｉｄｉａｌ　ａｎｔｉｇｅｎ［Ｊ］Ｊｎｆｉｅｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１９８８．　１０：６４９—６６０．　ｆ１５１　ＢＨ０ＧＡＬ　Ｂ　Ｓ，ＭＩＬＬＥＲ　Ｇ　Ａ，ＡＮＤＥＲＳＯＮ　Ａ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｐｃｔｅｎｔｉａｌ　ｏｆ　ａ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｎｔｉｇｅｎ　ａｓ　ａ　ｐｒｏｐｈｙｌａｔｉｃ￣ａｅｅｉｎｅ　ｆｏｒ　ｄａｖ－ｏｌｄ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ　ａｅｅｒｖｕｌｉｎａ　ａｎｄ　Ｅ　ｔｅｎｅｌｌａ　ｉｎｆｅｃｔｉｎｎｓⅢ．Ｖｅｔ　Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏ１．１９９２．３１：３２３—３３５．　ｆｌ６］ＶＥＲＭＥＵＬＥＮ　Ａ　Ｎ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ｖａｃｃｉｎｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｇａｉｎｓｔｃｏｃ（五（１ｉｏｓｉｓ：Ａ　ｒｅｖｉｅｗ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｉｎｔｏ　ｔｈｅ　ｎｅｘｔ　ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍⅢ．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌ　ｆｏｒ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１　９９８，２８：１　１　２　１一　ｌ１３０．　Ｉ　１７１　ＤＡＮＦＯＲＴＨ　Ｈ　Ｄ．Ｕｓｅ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ　ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｓｔａｇｅ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｐａｒａｓｉｔｅｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ【Ｊ］．Ａｍ　ｊ　Ｖｅｔ　Ｒｅｓ．１９８３。４４（９）：１７２２—１７２７．　ｆ１８１　ＢＲＯＴＨＥＲＳ　Ｖ　Ｗ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｓｕｔｒａｃｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｏｆ　Ｅ　ｔｅｎｅｌｌａｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ　ａｎｄ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｆｒｏｍ　ａ　ｃｌｏｎｅｄ　ｅＤＮＡ　ｉｎ　Ｅ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ．１９８８．２８：２３５—２４８．　［１　９］ＫＲＡＭＥＲ　Ｒ　Ａ．Ａｎ　Ｅ　ｔｅｎｅｌｌａ　ｇｅｎｅ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｉｔｈ　ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｔｏ　ｔｈｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｔｒａｎｓｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅｓ　ｏｆ　Ｅ　ｃｏｌｉ　ａｎｄ　ｂｏｖｉｎｅ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ　ｌ　ＪＩ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｂｉｏｅｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，．１９９３，　６０：３２７　一３３２．　ｆ２０１　Ｋ０　Ｃ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｈａｒａｃｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔａｒｇｅｔ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｏｆ　ａｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａｍｅｒｏｚｏｉｔｅｓ［Ｊ］．　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｅｈｅｍ　Ｐａｒａｓｉｔｏ１．１９９Ｏ．４ｌ：５３．　［２１］韩红玉，黄兵．鸡球虫重组疫苗的研究进展ＩＪｌ＿生物技术通报，２０００，　６：ｌ８—２３．　［２２１杨林，朱维．基球虫Ｅｔｐ２８基因的克隆硬其在杆状病毒系统中的表　达ｌＪ１＿生物化学与生物物理学报，１９９８（３）：２９３—２９８．　『２３１　Ｓ　ＨＩＲＬＥＹ　Ｍ　Ｗ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ　ｗｉｔｈ　ｌｉｖｅ　ｖａｃｃｉｎｅｓ　．Ｗｏｒｌｄ　Ｐｏｕｌｔｒｙ．１９９３．１８：２４—２７．　ｆ２４１　ＪＥＮＫＩＮＳ　Ｍ　Ｃ．Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｈｕｌｉａｎ：ｃ１０ｎｉ“ｇ　ｉｆ　ａ　ｅＤＮＡ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ａｎｉｍｍｕｎ０ｇｅｎｉｔ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｖｅｒａ１　ｒｅｌａｔｅｄ　ｍｅｒｏｚｉｏｔｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｎｄ　ｒｈｏｐｔｙｒ＂ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｍｅｎｔａｌ　Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１　９９０，７０：３５３—３６２．