２８６ 世界最新医学信息文摘２０１３年第ｌ３卷第３期 ・医学检验・ 浅谈电化学发光免疫法测定抗ＨＣＶ－ＩｇＧ 赵玉莹 （黑龙江省口腔病防治院，黑龙江哈尔滨１５００００） 摘要：目的探讨电化学发光免疫法测定抗ＨＣＶ－ＩｇＧ的原理及方法。方法采用双抗体夹心法原理进行测定。结论 Ａｎｔｉ．ＨＣＶ抗体检测可单独使用或与其他检测（如ＨＣＶ－ＲＮＡ）联合使用，检测个体是否感染丙型肝炎病毒和筛选被 关键字：检测检验；免疫；抗体 中图分类号：Ｒ４４６．１１＋２ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７１－３１４１．２０１３．０３．２１４ ０引言Ａｎｔｉ—ＨＣＶ抗体检测可单独使用或与其他检测（如ＨＣＶ—ＲＮＡ）联合使用，检测个体是否感染丙型肝炎病毒和 筛选被ＨＣＶ污染的血液和血制品。Ｅｌｅｃｓｙｓ Ａｎｔｉ－ＨＣＶ试剂 盒使用重组的核心区ＮＳ３和ＮＳ４蛋白肽抗原来检测Ａｎｔｉ一 ＨＣＶ抗体。 １ 标本采集 采集无抗凝静脉血２～３ｍｌ，也可使用肝素锂、 ＥＤＴＡ－Ｋ３或草酸钠抗凝血浆。按标本签收程序签收。不能 及时检测的标本可于２—８￣Ｃ保存。 ２ 试齐Ｕ ２．１试剂来源 德国罗氏公司原装配套试剂。 ． ２２ ．１ Ｍ 组成 ．耋 珠微粒（透明瓶 包被 Ｒ吐孽享 磁珠微粒，０．７２ｍｇ／ｍｌ，含防腐剂。 ～一缓 液（灰色瓶盖），每瓶７ｍ１，ＨＥＰＥｓｂ缓冲液， ｐＨ５．０；Ｒ２缓冲液（黑色瓶盖），每瓶７ｍｌ，ＨＥＰＥＳ缓冲液， ｐＨ５．０。 ２．２－３ Ｒｌａ 冻干的生物素化ＨＣＶ抗原（白色瓶盖），每瓶加１．２ｍｌ 溶解液溶解；Ｒ２ａ冻于的钌复合物标记ＨＣＶ抗原（黑色瓶 盖），每瓶加１．２ｍｌ溶解液溶解。 ２．２．４其他 Ｒｉｂ及Ｒｌａ的溶解液ｆ白色瓶盖），每瓶１．４ｍｌ水，经过 防腐处理；Ｒ２ｂ及Ｒ２ａ的溶解液（黑色瓶盖）每瓶１．４ｍｌ水， 经过防腐处理。 ２．３校准品 Ｃａｌ ｌ：阴性定标液（白盖）２瓶，ｌｍｌ／瓶人血清，含防 腐剂。Ｃａｌ２：阳性定标液（黑盖），２瓶，每瓶１．３ｍｌ，人抗 ＨＣＶ抗体阳性血清，经过防腐处理。对于ＨＢｓＡＧ和抗一 ＨＩＶ ｌ／２无反应。 ２．４质控品 Ｅｌｅｃｓｙｓ ＨＣＶ ｃｏｍｂｉ质控品１和２（ｐｒｅｃｉｃｏｎｔｒｏ１）。 ２．５其他所需辅助试剂 Ｅｌｅ ｙ 通用稀释液，Ｅｌｅ。ｓｙ 系统缓冲液（ｐｒｏＣｅｌ１）， Ｅｌ。。 ｙ 测量池清洗液ｃｌ Ｃ。１１），Ｅ１ 。 ｙ 添加剂液 （ｓｙｓＷａｓｈ），Ｅｌｅｃｓｙｓ系统清洗液（ｓｙｓＣｌｅａｎ）。 ３仪器 德国罗氏公司Ｅ６０１电化学发光免疫分析仪。 ４校准程序 ４．１每批ＨＣＶ ｃｏｍｂｉ试剂盒必须用新鲜试剂盒ＨＢｓＡｇ Ｃａｌ ｌ、Ｃａｌ ２校准一次。另外。以下情况需要再次校准： ４．１．１ 同一批号试剂使用１个月。 ４．１．２一盒试剂在仪器上放置时间超过７ｄ。 ４．１．３系统误差造成的质控失控。 ４．２在编辑各项目的参数时１１１。已经在Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ． Ｃａｌｉｂ菜单中定义好了校准类型和几点校准 因此在对各项目进行校准时，只需在校准菜单 Ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ中进行即可。进入ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ一 ｔａｔｓ菜单，用鼠 标选择需校准的项目，再根据需要点单点校准（ＢＬＡＮＫ键） 或两点校准（ＴＷＯ ＰＯＩＮＴ键）、跨距校准（ＳＰＡＮ键）、多 点校准（ＦＵＬＬ键），再选择其他项目进行相应选择，最后 毒 警 ｌ仪ｉｂ器ｒａｔ开ｉｏｎ始－塞 ０ｒ中定义好 …￣ｌ Ｅ键Ｃａ看ｌｉｂ校ｒａｔ准ｉｏ结ｎ－Ｓ果ｔａｔｕｓ菜单中看ｔｉｏｎ 看．￣Ｃａｌｉｂｒ 盖曩 ：口７。 ，，￣ｒｅａｃ“ 每个。 校５操作步骤 ５．１样本检测程序 ５．１．１单个样本输入 在主菜单下选择Ｗｏｒｋｐｌａｃｅ—Ｔｅｓｔｓｌｅｃｔｉｏｎ，在Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ＮＯ．栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组 合项目，点ＳＡＶＥ键，样本号自动累加。 ５．１．２批量常规标本的输入 在主菜单下选择Ｗｏｒｋｐｌａｃｅ—Ｔｅｓｔｓｌｅｅｔｉｏｎ，在Ｓｅｑｕｅｎｃｅ． ＮＯ．栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目 或组合项目，点ＲＥＰＥＡＴ，输入该批标本的最后一个标本号， 点０Ｋ即可。 ５．２进样分析 将标本按在Ｗｏｒｋｐｌａｃｅ菜单中输入的标本号顺序在样本 架上排好，放入进样盘内，按ＳＴＡＲＴ键，输入该批上机标 本的起始标本号，再点ＳＴＡＲＴ键，仪器自动开始推架检测 标本。 ５－３计算方法 仪器会自动根据Ｃａｌ ｌ和Ｃａｌ ２的测定值计算Ｃｕｔ—ｏｆｆ值。 每一个标本的结果以有反应性或无反应性及Ｃｕｔ－ｏｆｆ指数形 式（标本信号／Ｃｕｔ—ｏｆｆ）报告。 ６质量控制 ６．１室内质控 用质控品ｌ和质控品２，至少每２４ｈ或每一次校准后测 定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测 世界最新医学信息文摘２０１３年第１３卷第３期 值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应 采取纠正措施。 ｍ１）的影响。 ２８７ ６．２具体操作 参考罗氏电化学发光操作程序 】。 ７结果解释 样本的ＣＯＩ值＜０．９判断为无反应性。样本的ＣＯＩ值 ≥１．０判断为有反应性。所有初次检测有反应性的样本必须 重复双份检测。样本的ＣＯＩ值≥０．９且＜１．０判断为临界值。 所有临界样本必须重复双份检测。如果二次结果均为无反 应性，样本可判断为抗一ＨＣＶ阴性。如果重复检测结果均 为有反应性或一个有反应性、一个临界，则该样本判断为 ９．２ 回收率标准，阳性样本回收率在初始值的±２０％ 之内，阴性样本的ＣＯＩ值≤０．５。 ９．３对于接受高剂量生物素治疗的患者（＞５ｍｇ／ｄ）， 必须在末次生物素治疗８ｈ后采集样本。 浓度达１ ０００Ｕ／ｍｌ的类风湿因子对检测无影响。 ９．４ Ｅｌｅｃｓｙｓ Ａｎｔｉ—ＨＣＶ检测未发现高浓度钩状效应导 致的假阴性反应。 ９．５体外对１８种常用药物和２种用于治疗ＨＣＶ的药 物进行试验未发现有影响。 重复有反应性。重复有反应性的样本必须进行补充试验ｆ如 免疫印迹分析或ＨＣＶ ＲＮＡ检测）。如果重复检测结果均为 临界或一个无反应性，一个临界，则建议随访。 ９．６由于检测试剂中含有单克隆鼠抗体，因此，某些 接受单克隆鼠抗体治疗或诊断的患者样本检测结果可能有 误。 ９．７少数病例中极高浓度的链霉素抗体会影响检测结 果。 ８分析性能 ８．１分析特异性 使用Ｅｌｅｃｓｙｓ Ａｎｔｉ—ＨＣＶ试剂盒检测含有可能干扰物质 的７７４份样本：含有抗一ＨＢＶ、ＨＡＶ、ＨＥＶ、ＣＭＶ、ＨＳＶ、 ＨＩＶ、弓形虫、风疹和密螺旋体抗体；含有自身抗体及高滴 度的类风湿因子、ＩｇＧ、ＩｇＭ或ＩｇＡ抗体；ＨＢｓＡＧ和Ｅ大肠 埃希菌阳性；ＨＢＶ和流感疫苗接种后；非病毒性肝病。 ８．２精密度 应用Ｅｌｅｃｓｙｓ试剂盒、人血清样本和质控品验证重 复性（批内ｎ＝２１，批间ｎ＝１０）ＭＯＤ—ＵＬＡＲ ＡＮＡＬＹＴＩＣＳ Ｅｌ７０分析仪上按照ＣＬＳ１的ＥＰ５一Ａ执行，每天６次，共 ｌＯｄ（ｎ＝６０）。 ９．８ 由于从病毒感染到血清学表现需要较长时间，因 此在感染早期可能出现Ａｎｔｉ—ＨＣＶ阴性的检测结果。若怀疑 急性丙型肝炎病毒感染，则通过反转录聚合酶链扩增（ＲＴ— ＰＣＲ，如使用Ｃｏｂａｓ Ａｍｐｌｉｃｏｒ）进行ＨＣＶ ＲＮＡ检测可以确 定是否感染ＨＣＶ。Ａｎｔｉ—ＨＣＶ抗体检测能提示当前或以往 感染丙型肝炎病毒，但不能区分是急性、慢性或感染恢复。 必须认识到当前可靠的Ａｎｔｉ—ＨＣＶ检测方法的灵敏度均不 足以检测出全部潜在感染ＨＣＶ的个体。可能由于抗体浓度 低于检测下限或者抗体对试剂使用的抗原不反应。另外， Ｅｌｅｃｓｙｓ Ａｎｔｉ—ＨＣＶ检测不能完全排除非特异性的结果。 参考文献 ［１】 王金龙，叶伟成，邹红玲，等．ＣＥＡ电化学发光免疫分析法的建 立［Ｊ］．标记免疫分析与临床，２０１２年Ｏ２期． ［２】 王金龙，丘增泉，钟亮星．酶联免疫吸附法和电化学发光法检测 ＨＢｅＡｇ结果分析［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１０年０２期． ９干扰因素 ９．１ 检测结果不受黄疸（胆红素＜８５５ｔＬｍｏｌ／Ｌ或 ＜５０ｍｇ／ｄ１），溶血（血红蛋白＜１．０９ｒｅｏｏｌ／Ｌ或＜１．ｔ７５９／ ｄＤ，脂血（脂肪乳剂＜２ １００ｍｇ／ｄ１）和生物素（＜５０ｎｇ／ （上接第２８５页） 且校准标的物必须使用仪器所配套的。 部分血细胞分析仪并无配套校准物，这种情况下可以送 专业机构校准。另外在使用过程中必须要注重仪器保养和 维护，并填写仪器的维护保养记录，落实责任人，最好由 专人操作管理。 ３．２．４强化检验人员检验技术培训，熟练掌握操作规 程，全面了解各种影响因素。采集标本和检验程序必须严 格按照标准操作规程执行。不合理的采血部位也会影响到 本文通过对血常规检验过程中的误差原因进行分析，采 取合理对策加强分析前中后的质量控制。 减少非疾病因素对血常规检验结果准确性的影响，能够 提高检验质量，保证检验结果的准确性。为临床诊断和鉴 别提供准确可靠的依据。 参考文献 【１】 栾雪静，迟京凤．检验血液标本采集工作的探讨［Ｊ】．中国工业医 学杂志，２００８，２０（１）：２９—３Ｏ． 血常规检验的结果，在使用血细胞分析仪检测时，手指血 的准确性和重复性相对较差，因此血常规检验样本必须采 取静脉血样。 采集血样加抗凝剂等操作严格按照标准操作规范进行。 采血后必须及时送检，因为放置时间及保存温度都会影响 检测结果。 ［２ 陈芳建．血液标本保存时间对各生化检测指标的影响［２］Ｊ】．检验医 学，２００６，２１（１）：８７． ［３】 彭黎明，将能刚．血细胞参数检测的参考方法及其应用【Ｊ］．临床 检验杂志，２００３，２１（６）：３６９—３７１． ［４】 李永红，钟步云．血细胞分析仪测血小板结果偏低的原因分析及 校正方法［Ｊ］．临床检验杂志，２００１，１９（２）：１１２—１１３． ４结论
