[训练]实验五_叶绿体的分离与观察

一、实验目的

1. 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。

2. 观察叶绿体以及气孔、表皮细胞、保卫细胞的形态，加深对植物组织形态的了解。

二、实验原理

将植物组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状、稠密度，也与离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35mol/L 氯化钠或0.4mol/L 蔗糖溶液)中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。将匀浆液在1000 r/min 的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些末被破碎的完整细胞。然后在3000 r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0～4℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

三、实验用品 (一) 材料:新鲜菠菜 （二）器材:普通离心机、组织捣碎机、光学显微镜、500m1 烧杯2 个、250m1 量

筒1 个、滴管10 支、纱布若干、载玻片和盖片等。

（三）试剂:0.35mol/L NaCl 溶液。

四、实验操作----游离叶绿体的制备与观察

1、选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称20g 于100ml的

0.35mol/L NaCl 溶液中，装入组织捣碎机。

2、利用组织捣碎机低速(5000 r/min)匀浆3～5min。 3、将匀浆液用200 目尼龙网或6 层纱布过滤，收集于500m1 烧杯中。

4、取滤液1.5m1 在1000 r/min 下离心2min。弃去沉淀。

5、将上清液在3000 r/min 下离心5min。弃去上清液，沉淀即为叶绿体(混有部分

细胞核)。

6、将沉淀用0.35mol/L NaCl 溶液悬浮。

7、取叶绿体悬液1滴滴于载片上，加盖片后即可在普通光镜下观察。

五、观察结果

在普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有

较深的绿色小颗粒，即基粒。 六、实验建议

植物组织匀浆后要悬浮在等渗介质中进行差速离心；同时叶绿体的分离最好

在0～4℃的条件下进行。

七、实验报告及作业

1. 画出分离后的细胞组分（注明形态的放大倍数）。2. 分离细胞组分时，为什么要加入0.35mol/L 氯化钠？