维普资讯 http://www.cqvip.com 检验医学２００７年第２２卷第４期Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００７，￣ｏｌ ２２．Ｎｏ ４ 文章编号：１６７３—８６４０（２００７）０４－０４９６－０３ 中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标识码：Ａ 三维试验检测革兰阴性杆菌ＥＳＢＬｓ及ＡｍｐＣ酶 孟灵， 王应芳， 张润玲 （兰州大学第二医院检验科，甘肃兰州７３００３０） 摘要：目的 了解革兰阴性杆菌中产超广谱Ｂ一内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）、染色体头孢菌素酶（ＡｍｐＣ）的分布及分离 率。方法准确鉴定菌株，采用底物为头孢噻肟的三维试验，测定菌株中ＥＳＢＬｓ及ＡｍｐＣ酶。结果临床分离 １７５株革兰阴性杆菌中产ＥＳＢＬｓ ４９株，阳性率２８．０％，包括阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、鲍曼不动杆 菌、铜绿假单胞菌和弗劳地枸橼酸菌。产ＡｍｐＣ酶２２株，阳性率１２．６％，包括阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿 假单胞菌、产酸克雷伯菌。其中阴沟肠杆菌产ＥＳＢＬｓ及ＡｍｐＣ酶分离率均居首位（分别为５５．６％、３３．３％）。３ 株铜绿假单胞菌同时产ＡｍｐＣ酶和ＥＳＢＬｓ。结论院有流行。 我院产ＥＳＢＬｓ菌以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌 为主。产ＡｍｐＣ酶以阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌为主。超超广谱Ｂ．内酰胺酶（ＳＳＢＬｓ）菌株在医 关键词：三维试验；革兰阴性杆菌；超广谱Ｂ一内酰胺酶；头孢菌素酶 近年来，随着第３代头孢菌素在临床的大量 使用，产耐药酶的革兰阴性杆菌日渐增多，其中超 广谱Ｂ一内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）、高产染色体头孢菌素 酶（ＡｍｐＣ）最常见，给临床治疗带来极大困难。 为协助临床选用高效抗生素，尽早、准确检测出产 酶株非常重要。三维试验是目前检测ＥＳＢＬｓ及 三、方法 ］ １．粗酶液制备 将新分离菌株密涂于１／４ Ｍ．Ｈ琼脂（直径９０ ｍｍ），３５℃过夜培养后，取全 部菌苔于１ ｍＬ无菌生理盐水中，调节菌液浓度为 １０坨ＣＦＵ／ｍＬ。菌悬液置一３０℃冷冻，２０℃解冻， 反复５次，每次＞２ ｈ。冻融后菌液１２ ０００ ｒ／ｒａｉｎ ＡｍｐＣ酶的最好方法之一ｌｌ Ｊ。我们对１７５株革兰 阴性杆菌，利用三维试验进行了产酶株的检测。 材料和方法 一离心１０ ｒａｉｎ。上清液经０．２ ｍ滤菌器过滤收集 于无菌管中。 ２．１３－内酰胺酶测定采用头孢硝噻吩纸片确 定有Ｂ一内酰胺酶的存在，阳性酶液放入低温冰箱 、菌株 ２００５年５至９月兰州大学第二医院临床标 本分离到的革兰阴性杆菌１７５株。其中大肠埃希 菌４０株、肺炎克雷伯菌２４株、产酸克雷伯菌６ 株、阴沟肠杆菌３０株、铜绿假单胞菌２２株和鲍曼 不动杆菌２２株，弗劳地枸橼酸菌６株、其他菌２５ （一３０℃）保存。 ３．酶型测定将ＣＴＸ纸片贴于涂布了大肠 埃希菌（ＡＴＣＣ ２５９２２）的Ｍ—Ｈ平板，距纸片 ５ ｍｍ处用刀片向外切４个裂隙，分别编为１、２、３、 ４号，在４个裂隙中加入待测的粗酶液（３０ ）， 粗酶液（３０ Ｌ）＋ＣＬＡ液（２ ｍｍｏｌ／Ｌ １０ ｔｘＬ），粗 株。同一患者相同菌株不计在内。 二、试剂 酶液（３０ Ｌ）＋ＣＬＯ液（２ ｍｍｏｌ／Ｌ，１０ ｔｘＬ），粗酶 液（３０ Ｌ）＋ＣＬＡ液（２ ｍｍｏｌ／Ｌ，１０ ｔｘＬ）＋ＣＬＯ液 水解酪蛋白（Ｍ－Ｈ）琼脂、头孢噻肟纸片 （ＣＴＸ，３０ ｇ／片）、头孢硝噻吩纸片（Ｎｉｔｒｏｃｅｆｉｎ）均 （２ ｍｍｏｌ／Ｌ，１０ ｔｘＬ），３５℃过夜培养。 ４．结果判读平皿上若在裂隙与ＣＴＸ纸片 交界处出现矢状的细菌生长区域者判为三维试验 阳性，反之则为阴性。根据ＡｍｐＣ酶可被ＣＬＯ抑 制而不被ＣＬＡ抑制，而ＥＳＢＬｓ可被ＣＬＡ所抑制 购自英国Ｏｘｏｉｄ公司。克拉维酸（ＣＬＡ）购自山西 威奇达药业有限公司，氯唑西林（ＣＬＯ）购自山西 博康药业有限公司。质控菌株大肠埃希菌（ＡＴＣＣ ２５９２２）、肺炎克雷伯菌（ＡＴＣＣ ７００６０３）购自卫生 部临床检验中心，阴沟肠杆菌（０２９Ｍ）为甘肃省临 床检验中心惠赠。 作者简介：孟而不被ＣＬＯ抑制的原理，１号、２号阳性为单产 ＡｍｐＣ酶；１号、３号阳性单产ＥＳＢＬｓ酶；１号、２ 号、３号阳性为同时产ＥＳＢＬｓ、ＡｍｐＣ酶。见图１。 灵，女，１９７１年生，硕士，主管技师，主要从事临床微生物检验及细菌耐药性研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com 维普资讯 http://www.cqvip.com ・４９８・ 检验医学２００７年第２２卷第４期Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００７，Ｖｏｌ ２２．Ｎｏ ４ ＡｍｐＣ酶中，阴沟肠杆菌分离率达３３．３％。高的 产酶率大大增加了阴沟肠杆菌的耐药性，应该给 予高度重视。 ２２株铜绿假单胞菌中，产ＡｍｐＣ酶６株，产 参考文献 Ｃｏｕｎｄｒｏｎ ＰＥ，Ｍｏｌａｎｄ ＥＳ，Ｔｈｏｍｓｏｎ ＫＳ．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＡｍｐＣ ｂｅｔａ－－ｌａｃｔａｍａｓｅｓ ａｍｏｎｇ Ｅｓｃｈｅ－－ ｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ，Ｋｌｅｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｕｓ ｍｉｒａｂｉｌｉｓ ＥＳＢＬｓ ３株，产ＥＳＢＬｓ率相对较低，但这３株均同 时产ＥＳＢＬｓ和ＡｍｐＣ酶，属于ＳＳＢＬｓ菌株，表明 ｉｓｏｌａｔｅｓ ａｔ ａ ｖｅｔｅｒａｎｓ ｍｅｄｉｃａｌ ｃｅｎｔｅｒｌ Ｊ １．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏ－ ＳＳＢＬｓ菌株在我院有流行，ＳＳＢＬｓ菌株耐药谱极 为广泛，临床治疗仅亚胺培南有效，有效率达 ９７．４％＿２ Ｊ应引起重视。我们的研究结果显示鲍 ，ｂｉｏｌ，２０００，３８（５）：１７９１－１７９６． 胡付品，朱德妹，吴浞．三维试验法检测肠杆菌属 细菌中超广谱Ｂ．内酰胺酶和ＡｍｐＣ酶［Ｊ］．中国抗 感染化疗杂志，２００４，４（５）：２８３－２８６． 马越，金少鸿．我国细菌耐药性检测研究的新特 点［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００５，２８（４）：３４４—３４８． 曼不动杆菌产ＡｍｐＣ酶和产ＥＳＢＬｓ分离率均为 ２２．７％，菌株中未发现ＳＳＢＬｓ，与文献报道有差 异 Ｊ。鲍曼不动杆菌占不动杆菌临床分离株的 ８０％左右，是医院感染重要的病原菌之一，在医院 肖庆忠，苏丹虹，江洁华，等．广州地区３ ５００株革兰 阴性杆菌ＴＥＭ和ＳＨＶ型超广谱Ｂ一内酰胺酶基因 分型研究［Ｊ］．中华检验医学杂志，２００５，２８（１０）： １０１０－１０１４． 环境中分布广泛并长期存活，同时对多种抗生素 耐药，耐药机制中ＥＳＢＬｓ、ＡｍｐＣ酶以及金属酶的 产生占重要地位，对重症监护病房（ＩＣＵ）的患者 Ｉ二 ］Ｊ］Ｊ］Ｊ］Ｊ］Ｊ 黄支密，陈榆，毛培华，等．下呼吸道感染鲍曼不 和危重患者威胁很大，易造成暴发流行。因此，临 床要避免滥用抗生素，重视细菌耐药酶的检测，控 动杆菌ＥＳＢＬｓ表型及基因型检测［Ｊ］．江西医学检 验，２００４，２４（１）：１３—１５． （收稿日期：２００７－０３－１２） 制耐药菌株的传播，减少医院感染的发生。 文章编号：１６７３－８６４０（２００７）０４－０４９８－０５ 中图分类号：Ｒ４４６．６２ 文献标识码：Ａ （本文编辑：姜敏） 急性冠脉综合征患者ＣＩＭ＋ＣＤ２８一Ｔ 细胞的抗原特异性探讨 黄立娟， 崔 颖， 邵晶莹， 孙文英， 刘 伟 （哈尔滨医科大学附属第二医院检验科，黑龙江哈尔滨１５００８６） 摘要：目的探讨急性冠脉综合征（ＡＣＳ）患者ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞的抗原特异性。方法２２例ＡＣＳ患者和 １２例稳定性心绞痛（ＳＡＰ）患者以及１０名健康体检者外周血白细胞经巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）、肺炎衣原体（ｃｐ）、 人热休克蛋白６０（ｈＨＳＰ６０）和氧化型低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）刺激培养，然后分离ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞，采用逆转 录一聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）测定细胞内干扰素 （ＩＦＮ一 ）和穿孔素ｍＲＮＡ表达，以转录上调作为标准来评价抗 原的识别。结果来自２２例ＡＣＳ患者中有１８例的ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞与ｈＨＳＰ６０反应，与ＨＣＭＶ、Ｃｐ和ｏｘＬＤＬ 不反应。ＳＡＰ患者的ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞对４种抗原都不反应。１０名健康体检者中有４名有ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细 胞，但这些细胞没有与ｈＨＳＰ６０反应。结论ｈＨＳＰ６０是ＡＣＳ患者中ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞识别的一种抗原，循环中 ｈＨＳＰ６０特异性ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞可能参与促成ＡＣＳ患者的血管损害。 关键词：ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞；心绞痛；人热休克蛋白６０；急性冠脉综合征 研究已证实急性冠脉综合征（ＡＣＳ）患者外周 血循环中ＣＩＭ ＣＤ２８一Ｔ细胞增加。这种细胞缺 乏ＣＤ２８分子表达而表达穿孔素和ＣＤ５７，因此该 基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目（１１５２１１０４） 细胞可能通过释放穿孔素致内皮细胞死亡，导致 动脉粥样硬化斑块破裂而参与ＡＣＳ的发病 。 目前ＡＣＳ患者中的ＣＤ４ ＣＤ２８一Ｔ细胞的抗原特 作者简介：黄立娟，女，１９６６年生，博士，副教授，主要从事血栓性疾病的发病机制研究。
