维普资讯 http://www.cqvip.com 检验医学2007年第22卷第4期Laboratory Medicine 2007, ̄ol 22.No 4 文章编号:1673—8640(2007)04-0496-03 中图分类号:R446.5 文献标识码:A 三维试验检测革兰阴性杆菌ESBLs及AmpC酶 孟灵, 王应芳, 张润玲 (兰州大学第二医院检验科,甘肃兰州730030) 摘要:目的 了解革兰阴性杆菌中产超广谱B一内酰胺酶(ESBLs)、染色体头孢菌素酶(AmpC)的分布及分离 率。方法准确鉴定菌株,采用底物为头孢噻肟的三维试验,测定菌株中ESBLs及AmpC酶。结果临床分离 175株革兰阴性杆菌中产ESBLs 49株,阳性率28.0%,包括阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、克雷伯菌属、鲍曼不动杆 菌、铜绿假单胞菌和弗劳地枸橼酸菌。产AmpC酶22株,阳性率12.6%,包括阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿 假单胞菌、产酸克雷伯菌。其中阴沟肠杆菌产ESBLs及AmpC酶分离率均居首位(分别为55.6%、33.3%)。3 株铜绿假单胞菌同时产AmpC酶和ESBLs。结论院有流行。 我院产ESBLs菌以阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌 为主。产AmpC酶以阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌为主。超超广谱B.内酰胺酶(SSBLs)菌株在医 关键词:三维试验;革兰阴性杆菌;超广谱B一内酰胺酶;头孢菌素酶 近年来,随着第3代头孢菌素在临床的大量 使用,产耐药酶的革兰阴性杆菌日渐增多,其中超 广谱B一内酰胺酶(ESBLs)、高产染色体头孢菌素 酶(AmpC)最常见,给临床治疗带来极大困难。 为协助临床选用高效抗生素,尽早、准确检测出产 酶株非常重要。三维试验是目前检测ESBLs及 三、方法 ] 1.粗酶液制备 将新分离菌株密涂于1/4 M.H琼脂(直径90 mm),35℃过夜培养后,取全 部菌苔于1 mL无菌生理盐水中,调节菌液浓度为 10坨CFU/mL。菌悬液置一30℃冷冻,20℃解冻, 反复5次,每次>2 h。冻融后菌液12 000 r/rain AmpC酶的最好方法之一ll J。我们对175株革兰 阴性杆菌,利用三维试验进行了产酶株的检测。 材料和方法 一离心10 rain。上清液经0.2 m滤菌器过滤收集 于无菌管中。 2.13-内酰胺酶测定采用头孢硝噻吩纸片确 定有B一内酰胺酶的存在,阳性酶液放入低温冰箱 、菌株 2005年5至9月兰州大学第二医院临床标 本分离到的革兰阴性杆菌175株。其中大肠埃希 菌40株、肺炎克雷伯菌24株、产酸克雷伯菌6 株、阴沟肠杆菌30株、铜绿假单胞菌22株和鲍曼 不动杆菌22株,弗劳地枸橼酸菌6株、其他菌25 (一30℃)保存。 3.酶型测定将CTX纸片贴于涂布了大肠 埃希菌(ATCC 25922)的M—H平板,距纸片 5 mm处用刀片向外切4个裂隙,分别编为1、2、3、 4号,在4个裂隙中加入待测的粗酶液(30 ), 粗酶液(30 L)+CLA液(2 mmol/L 10 txL),粗 株。同一患者相同菌株不计在内。 二、试剂 酶液(30 L)+CLO液(2 mmol/L,10 txL),粗酶 液(30 L)+CLA液(2 mmol/L,10 txL)+CLO液 水解酪蛋白(M-H)琼脂、头孢噻肟纸片 (CTX,30 g/片)、头孢硝噻吩纸片(Nitrocefin)均 (2 mmol/L,10 txL),35℃过夜培养。 4.结果判读平皿上若在裂隙与CTX纸片 交界处出现矢状的细菌生长区域者判为三维试验 阳性,反之则为阴性。根据AmpC酶可被CLO抑 制而不被CLA抑制,而ESBLs可被CLA所抑制 购自英国Oxoid公司。克拉维酸(CLA)购自山西 威奇达药业有限公司,氯唑西林(CLO)购自山西 博康药业有限公司。质控菌株大肠埃希菌(ATCC 25922)、肺炎克雷伯菌(ATCC 700603)购自卫生 部临床检验中心,阴沟肠杆菌(029M)为甘肃省临 床检验中心惠赠。 作者简介:孟而不被CLO抑制的原理,1号、2号阳性为单产 AmpC酶;1号、3号阳性单产ESBLs酶;1号、2 号、3号阳性为同时产ESBLs、AmpC酶。见图1。 灵,女,1971年生,硕士,主管技师,主要从事临床微生物检验及细菌耐药性研究。 维普资讯 http://www.cqvip.com 维普资讯 http://www.cqvip.com ・498・ 检验医学2007年第22卷第4期Laboratory Medicine 2007,Vol 22.No 4 AmpC酶中,阴沟肠杆菌分离率达33.3%。高的 产酶率大大增加了阴沟肠杆菌的耐药性,应该给 予高度重视。 22株铜绿假单胞菌中,产AmpC酶6株,产 参考文献 Coundron PE,Moland ES,Thomson KS.Occurrence and detection of AmpC beta--lactamases among Esche-- richia coli,Klesiella pneumoniae,and Proteus mirabilis ESBLs 3株,产ESBLs率相对较低,但这3株均同 时产ESBLs和AmpC酶,属于SSBLs菌株,表明 isolates at a veterans medical centerl J 1.J Clin Micro- SSBLs菌株在我院有流行,SSBLs菌株耐药谱极 为广泛,临床治疗仅亚胺培南有效,有效率达 97.4%_2 J应引起重视。我们的研究结果显示鲍 ,biol,2000,38(5):1791-1796. 胡付品,朱德妹,吴浞.三维试验法检测肠杆菌属 细菌中超广谱B.内酰胺酶和AmpC酶[J].中国抗 感染化疗杂志,2004,4(5):283-286. 马越,金少鸿.我国细菌耐药性检测研究的新特 点[J].中华检验医学杂志,2005,28(4):344—348. 曼不动杆菌产AmpC酶和产ESBLs分离率均为 22.7%,菌株中未发现SSBLs,与文献报道有差 异 J。鲍曼不动杆菌占不动杆菌临床分离株的 80%左右,是医院感染重要的病原菌之一,在医院 肖庆忠,苏丹虹,江洁华,等.广州地区3 500株革兰 阴性杆菌TEM和SHV型超广谱B一内酰胺酶基因 分型研究[J].中华检验医学杂志,2005,28(10): 1010-1014. 环境中分布广泛并长期存活,同时对多种抗生素 耐药,耐药机制中ESBLs、AmpC酶以及金属酶的 产生占重要地位,对重症监护病房(ICU)的患者 I二 ]J]J]J]J]J 黄支密,陈榆,毛培华,等.下呼吸道感染鲍曼不 和危重患者威胁很大,易造成暴发流行。因此,临 床要避免滥用抗生素,重视细菌耐药酶的检测,控 动杆菌ESBLs表型及基因型检测[J].江西医学检 验,2004,24(1):13—15. (收稿日期:2007-03-12) 制耐药菌株的传播,减少医院感染的发生。 文章编号:1673-8640(2007)04-0498-05 中图分类号:R446.62 文献标识码:A (本文编辑:姜敏) 急性冠脉综合征患者CIM+CD28一T 细胞的抗原特异性探讨 黄立娟, 崔 颖, 邵晶莹, 孙文英, 刘 伟 (哈尔滨医科大学附属第二医院检验科,黑龙江哈尔滨150086) 摘要:目的探讨急性冠脉综合征(ACS)患者CIM CD28一T细胞的抗原特异性。方法22例ACS患者和 12例稳定性心绞痛(SAP)患者以及10名健康体检者外周血白细胞经巨细胞病毒(HCMV)、肺炎衣原体(cp)、 人热休克蛋白60(hHSP60)和氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激培养,然后分离CIM CD28一T细胞,采用逆转 录一聚合酶链反应(RT—PCR)测定细胞内干扰素 (IFN一 )和穿孔素mRNA表达,以转录上调作为标准来评价抗 原的识别。结果来自22例ACS患者中有18例的CIM CD28一T细胞与hHSP60反应,与HCMV、Cp和oxLDL 不反应。SAP患者的CIM CD28一T细胞对4种抗原都不反应。10名健康体检者中有4名有CIM CD28一T细 胞,但这些细胞没有与hHSP60反应。结论hHSP60是ACS患者中CIM CD28一T细胞识别的一种抗原,循环中 hHSP60特异性CIM CD28一T细胞可能参与促成ACS患者的血管损害。 关键词:CIM CD28一T细胞;心绞痛;人热休克蛋白60;急性冠脉综合征 研究已证实急性冠脉综合征(ACS)患者外周 血循环中CIM CD28一T细胞增加。这种细胞缺 乏CD28分子表达而表达穿孔素和CD57,因此该 基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目(11521104) 细胞可能通过释放穿孔素致内皮细胞死亡,导致 动脉粥样硬化斑块破裂而参与ACS的发病 。 目前ACS患者中的CD4 CD28一T细胞的抗原特 作者简介:黄立娟,女,1966年生,博士,副教授,主要从事血栓性疾病的发病机制研究。