科技论坛 民营科技２０１６年第１２期 基于分子生物学方法的食品微生物检测技术研究 李蕴 （长春科技学院，吉林长春１３００００） 摘要：主要分析了常见的分子生物方法在食品微生物检测中的应用，并对分子生物学在食品检测中的使用情况进行了论述。 关键词：分子生物学；微生物检测技术；研究 目前，在我国社会的不断发展形势下，人们对食品安全提出了更 高的要求。在生物研究领域的得到了飞速发展的同时，也对其检测手 段提面临着更严峻的挑战。就分子生物学而言，相关人员通过使用该 检测手段能够对食品中的微生物进行判断。 植物乳杆菌，相关人员利用ＲＡＰＤ分析法得出了非生产用酵母菌株与 标准清酒假丝酵母菌株具有相近的遗传特质。止匕夕 ，针对葡萄球菌、大 肠埃希氏、沙门氏菌和志贺氏菌等研究，都采用了这种技术方法。 ４分子生物学在食品检测中的使用情况 １分子生物学的概念阐述 该实验主要利用相关探针手段，利用有关菌落杂原位的杂交手 分析生物学是属于一门基础学科，简单的说是将分子当做主要 段对５２株食品进行分析，从而得到相应的ＥＳＩＥＣ大肠杆菌。 对象，对其所产生的现象ｉ 亍研究。例如组成细胞的物质，会在哪种隋 况下发生变化。有关研究人员在对分子进行研究时，该学科能够很好 的呈现出人们探究生物物质的过程，获得生命所体现出的特殊意义。 ２分子生物学在食品微生物检测中的应用意义 分子生物学的各项研究成果已经渗透进了人们的实际生活中， 而目起到了促进社会发展，和为全世界解决实际问题的作用。比如将 酶催化产生的反应和原因运用到各类化学工业活动中，＾工进行酶的 模拟并生成新的催化剂，不仅能针对ｌ生地解决问题，还可以在化学工 业领域领导新的。除了在化学方面有所益处，对食品安全方面也 有巨大意义，它能够更新微生物检测技术，提升了食品安全，保障了食 品加工过程中产品的质量和人的健康。 ３常见的分子生物方法在食品微生物检测中的应用 ３．１核酸杂交法。核酸杂交法是相关人员通过以往微生物的形式进 行检测而出现的，其中还包含相应的针探手段。由于核酸杂交法主要 是利用ＤＮＡ、ＲＮＡ等相关检测方法得以实现的。因此，相关人员可以使 用相应的病衣原体核酸片段来进行探针工作，这样就会形成病原体核 酸一起杂交的状态，从而相关人员就可以对杂交以后所产生的信号做 好详细研究，判断所得到了病原体。 ３．２质粒ＤＮＡ图谱分型技术。质粒ＤＮＡ图谱分型技术可以对微生物 做好详细的检查。由于质粒ＤＮＡ在各种不同的菌株所呈现出来的形态 是不一样的，依据相应的对照表能够看出有关ＤＮＡ的序号，从而对 ＤＮＡ的具体形态进行判断。质粒属于非染色体而形成的遗产物质，和 染色体之间相比没有那么重要，这样就会使细菌可以自己做出相应的 举动，进而能够得到多种形式的指纹图谱。 在ＤＧＧＥ之后出现的ＮＡ３Ｖ￣纹图谱技术，也叫做温度梯度凝胶电 泳，不同于ＤＧＧＥ的凝胶中使用尿素和甲酚胺浓度梯度的方法，温度 梯度凝胶电泳使用了温度梯度和在引物的５端增￣Ｊ１１３０５０ｂｐＧｃ片段的 新技术。这种新的方式可以有效地统计出某一区块内，微生物的数量 和品种，还可以检测出其他未知的肠道细菌，虽然相关人员已将这项 ｒＧＧＥ技术运用在了人粪样微生物的探究分析中，但是针对食品的运 用还很少。 ３－３染色体ＤＮＡ性内切酶分析技术。染色体ＤＮＡ在经过性 核酸内切酶ＥｏｏＲＩ和Ｂｇｌ １Ｉ消化后，其片段利用琼脂糖凝胶电３．４ＤＮＡ 的脉冲场凝胶电泳分型技术脉冲场凝胶电泳分型技术（ＰＦＧＥ）指在进 行酶切位点的性核酸内切酶消化细菌ＤＮＡ，其中产生的ＤＮＡ片 段较大，通常为１０－－８００ｋｂ，通过周期性改变电场方向的方法来实现有 效分离。脉冲场凝胶电泳分型技术生成的图谱更加清晰，其再现ｆ生与 分辨率很高。此外，每条３．５随机扩增多态ＤＮＡ技术（ＲＡＰＤ）。通过将随 机的引物进行ＰｃＲ反应，并加重靶细胞ＤＮＡ的比例进行分析，这一方 法被称为ＲＡＰＤ分析，它能够让研究人员了解ＤＮＡ片段的大小和数 量，再根据ＤＮＡ在不同基因组中的差异做出判断。这种方式能够将全 部ＤＮＡ基因定位成目标对象，可以辨识极小的差别，非常适合运用在 研究成果少，特点不明显的或是ＤＮＡ序列不凸显的真菌和乳酸菌的研 究中。有关研究人员利用ＲＡＰＤ＿ＰｃＲ技术发现了隐藏在红葡萄酒中的 ４．１实验材料。ＥｓＥｃ（１＿ｖＩ）断血清、ＬＧ琼脂平板、地高辛标记和检测 试剂盒、纤维素膜等。 ４．２实验方法。菌落原位杂交法。该实验手段简单的说是将相应的菌 株接种ＬＢ培养基放＾到大概３７℃的范围内进行培养，时间大概在２４／Ｊ、 时左右，然后将相应的纤维素膜同样在３７℃的温度下进行培养， 接着在相应的裂解液将膜放约３００ｓ，再放入到中和液里面大约 ３００ｓ，通过使用２ｘＳＳｃ将膜冲洗两遍，最终将已经完成晾晒的膜在大约 ８０￣Ｃ的水中进行长时间的烘烤，但是时间要控制在２，Ｊ、时以内。相关人 员使用杂交手段以后利用相应的试剂盒开始杂交４．５ｈ，等到呈现出颜 色以后，就可以进行观察并且得出相应的结果。 ４．３实验结果 ４．４结果分析。依据相关实验结果可以看出，食品分离出来的５２株 ＥＳＩＥＣ菌株，并且有８株能够确定为是ＥｓＩＥｃ大肠杆菌。相关人员在畜 禽便中将２ ＥＳＩＥＣ菌株分离出来，而且没有在其中发现出ＥＳＩＥＣ大 肠杆菌。从上述相关实验结果可以看出食品中含存在相应的大肠杆 菌。就食品而言，已经检查出里面的大肠杆菌存在相应的毒力基因，这 样就使ＥＳＩＥＣ存在安全的隐患，对食物中出现中毒的原因带来重要依 据。相关人员在对毒力因子进行分析的同时也使大肠杆菌有着相应的 分类，不单单是在血清型的物质上建立的，从而有效的攻破了传统对 血清学的判断所带来的制约ｌ生。该检测手段有着很高的技术水平，目 前已经和国家化的标准要求接轨，为我国研究菌种以及探索领域起到 了重要的作用。 综上所述，主要对食品微生物的检测以及鉴定技术展开了详细 的讨论，采用分子生物学的相关技术手段可以有效的改善食品检测的 质量，提高监管力度，以确保食品更加安全，让人们生活在一个健康的 环境中。分子生物学的检测技术在最近几年间异军突起，能够满足对 食品安全问题进行有效的检测，从而确保了消费者的合法权益不受侵 犯。相信在今后的生活中，这项检测技术将会得到更好的发展。 参考文献 『１１刘建成．分子生物学方法在食品微生物检测中的应用研究叫．生物 技术世界，２０１４（１）：１２０． 『２］王峰，潘赢，王学涛，等．食品微生枷｝夹速检测技术研究进展【ＪＪ．中国 微生态学杂志，２０１３（８）：４１． ［３］蒲洪兵．食品微生物快速检测技术的研究进展叨．江苏调味副食品， ２０１２（６）：１２１．
